第26 卷第2 期

    1998 年6 月

    衡 阳 医 学 院 学 报

    Jou rnal of HengyangM edical Co llege

    Vo l . 26 No. 2

    1998

    先天性尿道下裂外生殖器皮肤细胞内

    雄激素受体的含量测定

    李 春 谢家伦① 卢汉平②

    (深圳市宝安区人民医院, 深圳, 518101)

    摘 要 通过受体的放射配基结合分析, 对28 例不同程度的先天性尿道下裂患儿外生殖器皮

    肤细胞的雄激素受体进行了测定, 实验显示尿道下裂患儿外生殖器皮肤细胞内雄激素受体量减少,表明雄激素受体异常是先天性尿道下裂的原因之一。

    关键词 尿道下裂; 雄激素受体

    先天性尿道下裂是小儿泌尿外科常见的先

    天畸形。其病因除了可能与内分泌因素有关

    外[ 1 ]

    , 雄激素受体(androgen recep to r, AR ) 在

    其中所起的作用日益受到关注[ 2～ 4 ]。本实验采

    用放射配基结合分析的方法, 对先天性尿道上

    裂包皮细胞内的AR 含量进行直接的定量分

    析, 旨在探讨AR 在先天性尿道下裂成因所起

    的作用。并为今后在AR 分子病理学方面的研

    究打下基础。

    1 材料与方法

    1. 1 试剂

    3

    H2 R1881: SA 3. 2 TBq? mmo l 放化纯度

    98% (N ew England N uclear Cen t re) ; TEDGM

    缓冲液: 含 T r is2 HCl 10 mmo l? L、 EDTA 1. 5

    mmo l? L、巯基乙醇 6 mmo l? L、甘油 10%、钼酸

    钠 20 mmo l? L; STM 缓冲液: 含蔗糖 0. 25

    mmo l? L、T r is2 HCl 10 mmo l? L、M gCl2 1

    mmo l? L。

    以上缓冲液pH 7. 4, 置4℃保存, 使用前加

    终浓度为 1 mmo l? L 的PM SF (苯甲基碘酰氟,上海生物化学研究所)。

    1. 2 检测对象

    (1)正常学龄前男性儿童30 例。

    (2)先天性尿道下裂 28 例, 其中阴茎型 13

    例, 阴茎阴囊型7 例, 会阴8 例。年龄2～ 13 岁,平均年龄5 岁。

    以上分别取自手术切除的包皮, 离体标本

    立即置入液氮中保存, 1 周内完成测定。

    1. 3 实验方法

    (1)胞浆与胞核悬液的制备: 组织剪碎, 加

    入 TEDGM 缓冲液(1∶4 w? v) , 用高速细胞分

    散器或玻璃匀浆器匀浆。800×g 离心 10 m in。

    其上清液 30 000×g 离心 40 m in 后所得上清

    液为胞浆。首先离心后的沉渣用STM 缓冲液

    悬浮, 细胞尼龙网过滤, 滤过液 800×g 离心 10

    m in, 弃去上清液, 再次STM 缓冲液悬浮, 再次

    离心, 重复3 次所得沉渣即为胞核。加STM 缓

    冲液制成胞核悬液。用Low ry 法测定胞浆及胞

    核悬液的蛋白浓度, 胞浆及胞核的提取过程均

    在0～ 4℃的条件下进行。

    · 971 ·

    ① ② 中山医科大学放射免疫中心 收稿时间: 1998202203

    中山医科大学第一附属医院小儿外科

    ? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.(2)配基的特异性结合, 采用放射配基结合

    分析(RBA ) , 将制备好的胞浆及胞核分别与终

    浓度为 5. 0 nmo l? L 的3

    H2 R1881进行饱和反应。

    设置总结合(TB ) 及非特异性结合管(N SB )。

    L KB21210 多道液闪仪测量各反应管的放射性

    计数。

    (3)计算:

    SB= TB2 N SB

    SB (fmo l? m g P ro tein) =

    SB (DPM )

    SA (DPM ? fmo l)×反应液蛋白含量(m g)

    细胞内总SB= 胞核SB+ 胞浆SB

    (4)双抗法测量血雄激素浓度。

    (5)用 SPSS? PC6

    软件进行 t 检验及方差

    分析两两比较。

    2 结 果

    2. 1 尿道下裂外生殖器皮肤细胞AR 蛋白的

    表达水平(fmo l? m g 蛋白)

    2. 1. 1 尿道下裂组细胞内AR 含量较正常的

    低(P< 0. 01) 见表 1。

    2. 1. 2 尿道下裂的严重程度与细胞内AR 的

    含量无关(P> 0. 05) 见表 2。

    2. 1. 3 尿道下裂组与正常对照组血雄激素浓

    度均为 0. 1 ng? m l。

    表 1 细胞内总的AR 含量正常组与尿道下裂

    组的比较

    例数 均数 标准差 P 值

    正常对照组 30 108 . 66 44 . 03

    尿道下裂组 28 59 . 46 26 . 26

    P< 0 . 01

    表 2 不同类型尿道下裂细胞内总AR 量的两

    两比较(fmo l? m g 蛋白)

    例数 V±s

    正常对照组 30 108 . 66±44. 03

    阴茎型尿道下裂 13 54 . 84±29. 8

    阴茎阴囊型尿道下裂 7 51 . 77±6. 06

    会阴型尿道下裂 8 73 . 71±29. 10

    3 讨 论

    在生物个体发育过程中, 细胞内的基因并

    不都是同时表达的, 在同一时间内有的有活性,有的则无 ......